白细胞介素-2放免药盒操作说明书
IL-2(HY-10102) RIA KIT
白细胞介素-2 (Interleukin-2 IL-2)主要由活化的T淋巴细胞产生,天然的IL-2含有糖基,基因重组IL-2不含糖基,由133个氨基酸组成,分子量度15KD。其主要生物活性是促进T淋巴细胞和NK细胞的增殖,促进B细胞分化增殖,促进抗体生成等。因此IL-2在机体免疫应答、免疫调节和抗肿瘤免疫中具有重要作用。IL-2产生或表达异常与临床疾病有密切关系,通过测定人外周血、尿液或人激活淋巴细胞培养上清液中的IL-2水平,可作为对肿瘤、心血管病、肝病、红斑狼疮、麻风病、艾滋病等疾病诊断、预后及观察的方法,并用于器官移植后有无排斥反应的早期诊断。IL-2含量测定是基础研究和临床上应用IL-2免疫治疗的重要辅助指标之一。
药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1. IL-2缓冲液(PBS)1瓶; 直接使用。
2. PR分离剂(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。
3. IL-2标准品5瓶,浓度为1、3、9、27、81 pg/ml。
4. IL-2抗体2瓶,请将两瓶混匀后使用。
5. 125I - IL-2 1瓶(冻干品)。
样品收集:
取静脉血2ml ,注入试管中待凝固后,分离血清,-20℃保存2个月。测定前置室温或
冷水中复融,混匀后,4℃ 3000rpm/ min 离心5 min,取上清测定。
测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
IL-2 RIA加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I-IL-2 100 100 100 100 100
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摇匀4℃ 放置24小时以上
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:
本月标准品每瓶用 0.5 ml 缓冲液稀释
本月药盒抗体每瓶用 5.5 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 5.5 ml缓冲液稀释
本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标:
1、 NSB:<5%。
2、 灵敏度:<0.1pg/ml。
3、 标准曲线范围:1~81pg/ml。
4、 批内变异系数:CVw<7.0 %;
批间变异系数:CVw < 10% 。
5、 特异性:本血清与TNF、IL-6、IFN、IL-8等均无交叉反应。
6、 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
32±10ng/ml(n=50)。
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% 2.7 B0/T% 43 B/ B0 % 91 80 60 33 20
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生产日期:20074-30
有效日期:2007-5-30
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