TH糖蛋白放免试剂盒说明书
THP RIA KIT
TH糖蛋白（Tamm-Horsfall Glycoprotein THP）是一种肾脏的特异蛋白，对调节人体水分的平衡起重要作用。THP由肾脏亨氏袢升支及远端曲管上皮细胞内高尔基体产生，分子量为70，000～100，000，每个亚单位含有50个半胱氨酸残基，极易形成聚合体，聚合体解聚后不影响THP的免疫活性。正常时有少量排尿中并在血液中有一定的浓度；多种肾脏疾病能引发THP在血和尿中的浓度改变。在肾小球炎，反流性肾病、多囊肾、肾功能减退、肾功能衰竭时，血、尿中含量均减少，可能是由于肾功能恶化时远曲小管细胞数量减少所致。在蛋白尿酸中毒，脱水少尿，肾小管操作患者血，尿中THP含量均增加，可能是因为各种因素破坏了原来凝集和去凝集的平衡。结石患者血及尿THP含量较术前增加，增加的程度取决于移植肾的功能。
本试剂盒主要用于血清和尿液中THP的含量的测定，其指标为诊断急性和慢性肾功能衰竭、肾小球疾病、狼疮性肾脏移植手术预后提供重要依据。
测定原理：
本试剂盒采用竞争放射免疫分析法，即标准或待测样品中的THP与125I-THP共同与限量的特异性糖蛋白抗体在适宜的条件下进行竞争性结合反应。一部分125I-THP与抗体结合的比例取决于标准或待测样品中非标记THP的含量，非标记THP的含量越高，125I-THP与抗体形成的复合物越少，非标记THP的含量越低，125I-THP与抗体形成的复合物越多，抗原-抗体复合物用免疫分离剂沉淀下来，测定沉淀物的放射性计数，经过适当的数据处理后可获得标准曲线，从标准曲线上查出被测样品的THP含量，数据可由计算机自动处理。
药盒组成：
1、125I-THP （红色）1瓶 。
2、THP抗体（蓝色）1瓶。
3、分离剂（第二抗体）一瓶。
4、THP标准品7瓶。其浓度分别为：0、50、100、200、400、800、1600ng/ml
以上各组试剂均应摇匀使用。
操作方法：
1、血样处理：取静脉血分离血清。（2－8）℃放置可保存7天，－20℃以下冰冻保存，可放置2个月。脂血或溶血样品影响测定结果。
2、尿样处理：受试者24小时尿收集在预先加有10ml甲苯的容器中，测其总量(ml)，混匀，取2ml加盖密封后置4℃储存，存放时间不要超过10天，用前摇匀，取出适量尿样用生理盐水稀释到尿样体积的40倍，待加样用。
1、 验方法：试管编号，按下表程序操作：
操作表 （ 单位: ul）
|
管 别 |
标准管 |
样品 |
抗血清 |
125I-THP |
混匀，37℃温育1小时，任取三管测总T（CPM） |
分离剂 |
|
NSB管 |
200（S0） |
-- |
-- |
100 |
500 |
|
S0管 |
100 |
-- |
100 |
100 |
500 |
|
S1-S末管 |
100 |
-- |
100 |
200 |
500 |
|
样品管 |
-- |
100 |
100 |
100 |
500 |
混匀，室温放置15分钟，离心（3500转/分）15分钟，吸弃上清液，测定各管沉淀的放射性计数（CPM）。
数据处理：
1、计算机处理：建议函数模型采用三次多项式或log～logit法。
2、计算、绘图法：
计算各管的百分结合率：以S0（cpm数）为B0，各标准管Si（cpm数）为Bi，求各管的百分结合率。
Bi Bi管（cpm）—NSB管（cpm）
— %= —————————————— ×100
B0 B0管（cpm）—NSB管（cpm）
（1）线性回归：用logX～logitY回归，求出r、a、b值，样品含量可由下式计算得出。
- a +logit Y
Log X= ————
b
（2）绘图法：用各标准点计算的结果，在半对数坐标纸上绘制Bi/B0~logX标准曲线图或在log～logit坐标纸上绘制标准曲线图，未知样品浓度可根据Bi/B0的百分结合率从标准曲线图上查出。
正常叁考值：血清：107～379.6 ng/ml; 尿：12.4～61.6mg/24小时
24小时尿THP总量计算举例：某正常人24小时尿总量为2000ml（已减去加入的10 ml的甲苯的体积），稀释40倍后的测定浓度为400ng/ml，那么，其24小时尿THP总量为：400 ng/ml×40×2000 ml÷1000000 ng/mg=32mg
各实验室应建立自己的正常值，下列正常参考值仅供参考：
技术特性：
1、曲线范围：50～1600ng/Ml
2、灵敏度： < 20ng/mL
3、精密度：批内CVw<10%，批间CVb<15%
药盒参考数据：
|
指标 |
B/T（%） |
Bi/B0(%) |
|
项目 |
NSB |
S0 |
S1 |
S末 |
|
参数 |
2.5 |
83.6 |
87.8 |
11.3 |
生产日期：2007/01/25
有效日期：2007/01/28
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