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苷丙肽放免试剂盒操作说明书
  Galanin HY-10168 RIA   KIT
 
      苷丙肽(Galanin)是含30个氨基酸的神经肽,分子量为3155.56,它广泛分布于中枢和末梢
神经系统、胃肠道、肾上腺髓质、垂体和胰腺等。苷丙肽作为一种神经递质,在内分泌调节和神经传递上都起到重要作用,其生物活性主要为调节胃肠道平滑肌,抑制胰岛素和生长抑素分泌,调节垂体和下丘脑激素分泌功能,调节K+通道等。体内苷丙肽变化与Ⅰ、Ⅱ型糖尿病、肝脏疾病,高血压,动脉硬化、心血管疾病、肾脏疾病、胃肠疾病、巴金森氏病、痴呆症、记忆障碍、疼痛等有关。
标本采集:采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml(含150 IU以上)和10%EDTA.Na2 30uL,采血后立即置冰中,30分钟内4℃下2000转/分,离心15分钟取血浆置-20℃待测,可保存3-6个月。测定前,血浆标本需过C18拄。
药盒组成:
1、Galanin抗体一瓶。             2、125I- Galanin 标记一瓶。 
3、缓冲液一瓶。                  4、分离剂(第二抗体)一瓶。
5、去激素血浆一瓶。
6、Galanin标准品为5、10、20、50、100、200pg/mL。
    测定方法:
                           Galanin ­ RIA  操作程序      (单位:ul)
             ————————————————————————————
               试   剂       T      NSB     S0     S1~S6    样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——     600     300      300      300
               去激素血浆     ——     ——    200      200      ——
               标 准 品    ——     ——    ——     200      ——
               样    品    ——     ——    ——    ——      200
               抗    体    ——     ——    100      100      100    
              ————————————————————————————
                                摇匀,4℃ 24小时
             ————————————————————————————
              125I- Galanin   100      100     100      100      100 
             ————————————————————————————
                                摇匀,4℃ 24小时
             ————————————————————————————
               分 离 剂    ——     500     500      500     500
             ————————————————————————————
       混匀,室温放置20分钟,4℃3500转/分 离心15分钟,去上清,测定沉淀cpm值
 
   结果计算:
    以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.
       注意事项:
     本月药盒抗体每瓶用            ml缓冲液稀释
     本月药盒标记每瓶用            ml缓冲液稀释
     本月药盒标准品每瓶用          ml缓冲液稀释
     本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
附:血浆标本过柱步骤:
   1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分 离心20分钟,取上清。
   2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平
      衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
   3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
   4、用缓冲液A  5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
   5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
   6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
   7、取干燥后的西林瓶用250 ul  0.05M  PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实
      验时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
    8、结果计算:最终浓度×5.0
     Sep-Pak C-18: Waters.inc.   Massachusetts.USA     TFA:SIGMA .CO .USA   药盒不提供上述二种试剂(或材料)。
   正常参考值:9.16±3.45pg/ml。   
本月药盒参考数据:
       ————————————————————————————————
            T    NSB     S0        S1    S2   S3   S4     S5     S6   
        ————————————————————————————————
        CPM
        ————————————————————————————————
                 N/T%      B0/T%    B/ B0 %
        ———————————————————————————————— 
    备注:该药盒为美国凤凰公司《Galanin药盒操作说明书》翻译而来。
  生产厂家:美国凤凰制药有限公司(Phoenix Pharmaceuticals,INC)
    
 
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