β2-微球蛋白放免试剂盒操作说明书
β2-MG(HY-016) RIA KIT
临床意义:
人β2微球蛋白(β2-MG)分子量为11600-11815左右,进入血循环的β2-MG,可自由地从肾小球滤过,有99%的β2-MG被近曲小管重吸收并分解,所以血液β2-MG增高,可以反映肾小球滤过率降低或体内合成增多,尿中β2-MG排泄增多,反映肾小管功能异常。若β2-MG产生过多就可能是肾小球及肾小管机能受损伤,也有可能是某些恶性肿瘤的原因。
测定原理:
本试剂盒采用放射免疫分析方法测定。在均相竞争抑制反应中采用平衡法,对病人血清、尿液等样品中β2-MG进行直接测定。测定中,标准品、样品等中的β2-MG与125I-β2-MG竞争限量抗血清的结合位。当被测物中β2-MG的浓度高时,剩余的抗血清结合位就少,从而与抗血清结合的125I-β2-MG就少,反而结合就多。利用免疫分离剂分离出抗原—抗血清复合物,并测定复合物中的放射性计数。125I-β2-MG的结合量与样品中β2-MG的浓度呈函数关系,通过数据处理可求出样品中β2-MG的含量。
本药盒采用放射免疫分析法测定血清中β2-MG的含量,具有特异性高、准确度高、灵敏度高等特点,且操作简便、快速。
药盒组成:
1、β2-MG 标记一瓶 。
2、β2-MG 抗体一瓶。
3、免疫分离剂(第二抗体)一瓶。
4、β2-MG标准品7瓶:使用时每瓶用 ml蒸馏水溶解。浓度分别为0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0ug/ml。
样品收集:
1、 取静脉血,分离取血清,放2~8℃可保存一周,-20℃以下可保存60天。
2、 尿液采集:晨尿不要,让患者饮500ml水,一小时后留尿,测总体积,取5ml
用0.1 N NaOH调尿样PH 6-7.5进行直接测定。
操作方法:
操作表 单位:цL
管 别 |
标准品 |
血样品 |
尿样品 |
125I-β2-MG |
蒸馏水 |
抗血清 |
混匀,室温15~30℃放置0.5~1小时,任取三管测总T(CPM)。 |
分离剂 |
NSB管 |
50(S0) |
-- |
-- |
100 |
100 |
-- |
500 |
S0管 |
50 |
-- |
-- |
100 |
-- |
100 |
500 |
S1-S末管 |
50 |
-- |
-- |
100 |
-- |
100 |
500 |
样品管 |
-- |
50 |
-- |
100 |
-- |
100 |
500 |
尿样品管 |
-- |
-- |
200* |
100 |
-- |
100 |
500 |
*由于尿液样品为200цl加样与血清样品体积不同,离心时要注意平衡。
混匀,4℃放置15分钟,离心(3500转/分)15分钟,吸弃上清液,测定各管沉淀的放射性计数(CPM)。
数据处理:
1、 计算机处理:建议函数模型采用三次多项式或log~logit法。
2、 计算、绘图法:
计算各管的百分率:以S0(cpm数)为B0,各标准管Si(cpm数)为Bi,求各管的百分结合率。
Bi Bi管(cpm)—NSB管(cpm)
— %= —————————————— ×100
B0 B0管(cpm)—NSB管(cpm)
(1) 线性回归:用logX~logitY回归,求出r、a、b值,样品含量可由下式计算得出。
-a+logit Y
Log X= ————
b
(2) 绘图法:用各标准点计算的结果,在log~logit坐标纸上绘制标准曲线图,未知样品浓度可根据Bi/B0的百分结合率从标准曲线图上查出。
正常叁考值:
各实验室应建立自己的正常值,下列β2-MG正常参考值仅供参考:
血清样品:(1.69-3.40)цg/ml
尿液样品:(0.023-0.4)цg/ml
注:从曲线中查得的尿液样品结果就除以4,即得尿液样品中β2-MG的实际含量。
技术特性:
1、曲线范围:(0.2~10)цg/ml
2、灵敏度: <0.1цg/ml
3、特异性: β2-MG抗血清与白蛋白、血红蛋白均无交叉反应。
4、精密度:批内变异CVw<6.5%,批间变异CVb<12%
保存及有效期:
药盒于(2~8)℃避光保存,切勿冻存。自检定合格之日起有效期为45天。
药盒参考数据:
指标 |
B/T(%) |
Bi/B0(%) |
项目 |
NSB |
S0 |
S1 |
S末 |
参数 |
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生产日期:
有效日期:
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