用途:
本试剂用于测定人血清中CK-MB的酶活浓度。
测定原理:
CK-MB在诊断心肌梗塞时,有特异性。CK-MB有CK-M和CK-B两个亚基组成,试剂加入CK-M抗体,专一抑制CK-M亚基,然后测定CK-B亚基酶活浓度,结果乘以2,即得CK-MB的酶活浓度。
CK
磷酸肌酸+ADP----- 肌酸+ATP
HK
ATP+葡萄糖---------葡萄糖-6-磷酸+ADP
G6PDH
葡萄糖-6-磷酸+NADP+ -------- 6-磷酸-葡萄糖酸+NADPH+H+
试剂盒主要成分与浓度:
试剂 |
主 要 成 分 |
实验浓度 |
R1 |
己糖激酶(HK)
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)
ADP
AMP
Ap5A
NAC
NADP
CK-M抗体
磷酸肌酸 |
≥3000U/L
≥2000U/L
2mmol/L
5mmol/L
10μmol/L
20mmol/L
2mmol/L
≥2000U/L
30mmol/L |
R2 |
咪唑缓冲液(pH6.7 25℃)
葡萄糖 |
0.1mmol/L
20mmol/L |
CK-MB质控血清 (见质控血清说明书) |
试剂稳定性:
原装试剂在2~8℃避光保存,有效期12个月。
样品:
新鲜无溶血血清,肝素抗凝血浆或EDTA血浆。
血清25℃ 1小时后CK-MB活力下降:<10%
血清4℃ 24小时后CK-MB活力下降:<10%
操作步骤:
波长:340nm 温度:37℃ 比色杯光径:1cm
试剂开瓶即可使用
|
空白管 |
样品管 |
样 品 |
— |
28μl |
蒸馏水 |
28μl |
— |
R1 |
350μl |
350μl |
混匀,保温5分钟 |
R2 |
175μl |
175μl |
混匀,保温4分钟,准确测定1分钟吸光度变化 |
计算:
CK-MB(U/L)=(△A样品/分-△A空白/分)×F
Vt
F = -------------- ×1000×2 = 6270
Vs×消光系数
Vt = 反应总体积 Vs = 样品体积
NADPH在340nm波长下毫克分子消光系数=6.3
参考值:
当以下3种情况同时存在时,心肌损伤可能性大。
1 |
男
CK
女 |
>190U/L2
>167U/L2 |
2 |
CK-MB |
>24U/L2 |
3 |
CK-MB |
酶活浓度在总CK酶活浓度的6%和25%之间1 |
参考文献:
1. Stein W.med welt,1985,36:572
2. Calculated Values:cf,Section“Temperature Convers-
ion Factors”
各医院应根据本地区实际情况建立自己的正常值。
线性上限:
CK-MB活力可达200U/L
注意事项:
1. 当△A/分变化率≥0.33时,用生理盐水稀释后再重新测定,结果乘以稀释倍数。
2. 在测定CK-MB之前,先测总CK酶活浓度,如果CK酶活浓度超过1000U/L,则用生理盐水稀释样品,使之低于1000U/L,然后再测。
3. 本产品仅用于体外诊断,内含叠氮钠,避免直接接触皮肤和眼睛,切勿吞咽。
4. 本产品应在2~8℃条件下贮存,避免在2~8℃以上及0℃以下存放。