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产品标准:国际通用标准

产品应用:用于组织细胞裂解

产品介绍:

         一.WIP组织细胞裂解液使用说明书        二.使用方法说明
         一. WIP组织细胞裂解液使用说明书
    产品简介
    WIP组织细胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation ),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本产品裂解细胞获得的裂解产物,可用于PAGE,蛋白印迹(Western Blot),免疫沉淀(immnolprecipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白与多肽的分离纯化。
    WIP裂解液的主要成分为Tris(pH 7.5,20mM),150mM NaCl,去垢剂Triton X-100以及多种蛋白酶抑制剂,无需自备PMSF、磷酸酶抑制剂等蛋白酶抑制剂。WIP不仅可以用于细胞培养物的裂解,也可直接用于大多数动物组织的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时,可强烈地抑制蛋白、多肽的降解,并保持原有的分子结构和蛋白间相互作用。
    用WIP裂解得到的组织细胞蛋白样品,可以用博奥森生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford试剂盒测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
        包装清单
        WIP组织细胞裂解液        30ml
        PMSF(100X)             0.3ml
        保存条件:
        -20℃保存,一年有效。
        注意事项:
        1.为获得****的实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。
        2.PMSF应现用现加。
        3.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
        4.蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触,请立即用流水冲洗,再向医疗保健结构咨询。

        二.使用方法说明
    1.培养细胞
    取出WIP裂解液,待融化后,颠倒混匀数次,适量分装冻存。在使用前取出,按比例加入PMSF(使其最终浓度为1mM),混匀,立即使用。
    贴壁细胞,去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用枪吹打数下,使WIP和细胞充分接触。通常WIP接触细胞数秒后细胞就会被裂解。
    悬浮细胞,收集培养细胞,离心去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗),用手指把细胞用力弹散,按6孔板每孔细胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果细胞数量较大,应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加WIP。用手指轻弹管底以促进WIP和细胞充分接触,裂解完全时应无明显的细胞颗粒。
    裂解物经10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
    裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
    2.组织样品
    取Ep管,分别称重标记,把组织剪切成小块装入Ep管中,称重。按每20毫克组织加100-200微升的比例加入WIP(如裂解不完全,可以适当增加WIP的用量;如需要的蛋白样品浓度较高,可以适当减少WIP的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
    如果组织样品本身非常细小,如淋巴细胞,可直接加入WIP裂解,通过振荡(Vortex)以使样品裂解完全

 
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