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  多肽及试剂盒
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                           BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书

     
         蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。博奥森开发的BCA蛋白质检测试剂(bicinchoninic acid)是理想的蛋白质定量方法;是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠,对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中,常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响,因此与之配合使用,可免除您实验中的许多烦恼。

基本原理:  碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。

主要特点:
    1.准确灵敏, 线性范围广: BCA试剂的蛋白质测定范围是10-2000ug/ml;
    2.快速:45分钟内完成测定,比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
    3.经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。
    4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
    5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。
包装及保存
      BCA试剂  A   室温保存
      BCA试剂  B   室温保存
      蛋白标准 C  -20℃保存  (5mg/1ml BSA)
        本试剂盒自订购之日起一年内有效。
 使用说明
    1.配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
    2.稀释标准品:取10微升标准品用PBS稀释至100微升(标准品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足到20微升。
    3.加适当体积样品到96孔板的样品孔中,补加PBS到20微升。
    4.各孔加入200微升BCA工作液,37℃放置30分钟。
    5.冷却到室温,酶标仪OD值562nm测定吸光度,根据标准曲线计算出蛋白浓度

注意事项
    1.在低温条件或长期保存出现沉淀时,可搅拌或37℃温育使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃
2.样品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果,请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒;高浓度的去垢剂也影响实验结果,可用TCA沉淀去除干扰物质。
    3.要得到更为精确的蛋白浓度结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线。
    4.当试剂A和B混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失,工作液在密闭情况下可保存1周。
    5.需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计,测定波长为540-595nm之间,562nm****。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时,试剂盒测定的样品数量会因此而减 少。使用温箱孵育时,应注意防止因水粉蒸发影响检测结果。
   

 
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