生长素GHRELIN放免试剂盒操作说明书
GHRELIN （HY-10034） RIA KIT
GHRELIN是一种含28个氨基酸残基的脑肠肽，主要由胃黏膜的内分泌细胞分泌，是生长激素促分泌素受体(GHS-R)的一种内源性配体,1999年由日本国立循环器病中心Kojima等[1]人从小鼠和人的胃组织中成功分离并鉴定.Ghrelin系由28个氨基酸构成的多肽,能够和GHS-R结合而刺激生长激素GH的分泌.就目前的研究报道来看,Ghrelin除调节生长激素分泌外,还在能量平衡、胃功能、心血管系统以及肿瘤生长等诸多方面表现出重要的生物学效应.
标本采集：采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml（含150 IU以上）和10%EDTA.Na2 30uL，采血后立即置冰中，30分钟内4℃下2000转/分，离心15分钟取血浆置-20℃待测，可保存3-6个月。
药盒组成：
1、GHRELIN抗体一瓶。 2、125I-GHRELIN 标记一瓶。
3、缓冲液一瓶。 4、分离剂（第二抗体）一瓶。
5、GHRELIN标准品1瓶,倍比稀释浓度为：10、 20、40、80、 160、320、640、1280ng/ml
测定方法：
ghrelin RIA 操作程序 （单位：ul）
————————————————————————————
试 剂 T NSB S0 S1~S6 样 品
————————————————————————————
缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I-ghrelin 100 100 100 100 100
————————————————————————————
摇匀，4℃ 24小时
————————————————————————————
分 离 剂 —— 500 500 500 500
————————————————————————————
混匀，室温放置20分钟，4℃3500转/分 离心15分钟，去上清，测定沉淀cpm值。
结果计算：
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测物结合百分率，
在半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.
注意事项：
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒有效期为一个月，分离剂在使用前充分混匀（不可冰冻）
测定前，血浆标本推荐过C18拄。
附：血浆标本过柱步骤：
1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A )，在4℃下3500转/分 离心20分钟，取上清。
2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA，即为缓冲液B，将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平衡，接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18，速度为1ml/3分钟，并收集上述淋洗液。
6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中，-42℃ 冷冻干燥 ，备用。
7、取干燥后的西林瓶用500 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解，并在振荡器上振荡3分钟。实验
时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种
试剂（或材料）。
正常参考值：55.25-95.140ng/ml 78.25±11.29ng/ml
本月药盒参考数据：
————————————————————————————————
T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
————————————————————————————————
CPM
————————————————————————————————
N/T% B0/T% B/ B0 %
————————————————————————————————
备注：该说明书由英国皇家医学院内分泌部《ghrelin药盒操作说明书》翻译而来。
（注：本实验操作程序略有改动）
Department of Endocrinology Royal Postgraduate Medical School
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所
免费电话：8008109828
邮 编： 100085
电 话：（010）88114651 (010) 56146198
传 真：（010）88112680
网址：www.sinoukbio.com
E-Mail:sinouk@163.com
QQ客服：1749417768
