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       尿皮质素(urocortin)放免药盒说明书
                                 Ucn(HY-116) RIA  KIT  
                    
     尿皮质素Urocortin(Ucn)是一含40个氨基酸的多肽,属于促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)家族的新成员。它不仅在脑组织中表达,而且也存在于外周组织,特别是在心脏中高表达。Ucn有高效的心血管作用,它可以降血压、增强心脏收缩力,还可提高心肌细胞对缺血-再灌注损伤的抵抗力。urocortin II除增强心肌收缩外,还直接作用于心肌细胞,它增加蛋白合成。有试验证明:心肌病小鼠模型滴注Urocortin,心肌收缩增强,体循环血管阻力降低。
试剂盒组成与配制:
     1、Ucn标准品1瓶,1000pg/瓶。用时每瓶加缓冲液1ml,然后倍比稀释成浓度为
        1286432168.04.02.01.00.5pg/ml。
     2、125I-Ucn  一瓶。
     3、Ucn抗体   一瓶。
     4、缓冲液 一瓶。
     5、分离剂(第二抗体)一瓶.
样本收集和提取:
     1、 静脉血3ml,注入含0.5M EDTA-Na2 30ul的试管中,混匀,离心,取血浆用66%的甲醇
           提取,真空干燥测定时用缓冲液复溶测定。           
           如贮于-20℃2-3月内测定不影响结果。
     2、 组织的提取:取大小适宜的组织块,立即称重后于煮沸的生理盐水(1ml)中煮
         沸3分钟,再加1N冰醋酸0.5ml 于匀浆器中匀浆提取,再用1NNaOH 0.5ml中
         和,离心3000转/分,30分钟(最好是低温离心)。取上清液贮存于-20℃以下
         待测样本用66%的甲醇提取,真空干燥测定时用缓冲液复溶测定。可保留2-3个月。
测定操作步骤
                      Ucn  RIA 操作程序              加样单位:ul
         ——————————————————————————————       
             试  剂      T       NSB     B0     S1-S8    标   本
         ——————————————————————————————  
            缓 冲 液  ——       300    200     ——       ——
            标 准 液  ——       ——    ——   200       ——
            标    本    ——       ——    ——   ——       200   
            抗    体    ——       ——    100    100       100  
          ——————————————————————————————     
                            混匀,4℃ 放置24小时
          ——————————————————————————————  
         125I-Ucn    100      100     100    100       100
         —————————————————————————————— 
                         混匀,4℃ 放置24小时
         ——————————————————————————————         
            分 离 剂    500      500    500     500       500
         ——————————————————————————————         
    混匀,室温放置15分钟,3500转/分离心15分钟。弃上清,测沉淀计数(cpm)。
 
结果计算:
    以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
   在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。   
注意事项:
        1、本月标准品每瓶用              ml蒸馏水稀释
        2、本月药盒抗体每瓶用            ml缓冲液稀释
        3、本月药盒标记每瓶用            ml缓冲液稀释
  
正常参考值
   各实验室应建立自己的正常值,下列正常参考值仅供参考  
   正常值约为8.14±1.43pg/ml
药盒的技术指标:
        1、灵敏度:≤ 3Pg/ml。
        2、重复性:批内cv< 8%,批间cv<12%。
        3、回收率:平均回收率 88%。  
本月药盒参考数据:
 ———————————————————————————————————————
   T       NSB       S0           S1      S2        S3      S4       S5      S6      
 ———————————————————————————————————————
  CPM
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         N/T%          B0/T%        B/ B0 %  
  ——————————————————————————————————————
 
     生产日期:
     有效日期:
    
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