硫氧还原蛋白放免药盒操作说明书
Trx（HY-10155） RIA KIT
硫氧还蛋白( Thioredox in, Trx ) 是一种小分子蛋白质,分子量约12kD。其广泛存在于原核、真核生物中。它与硫氧还蛋白还原酶( TR) 、还原型烟酰腺嘌呤二核苷磷酸( NADPH) 三者共同组成硫氧还蛋白系统( Trx 系统) 。它们都包含二硫键活性位点序列- Cys - Gly- Pro - Cys - 。1996 年Takashi 等从人的肺腺癌细胞系NCI- H441 中分离出一种大小为57kDa 的蛋白质, 证实其蛋白序列中含有硒半胱氨酸( SeCys) 。此蛋白利用硫氧还蛋白提供电子,调NADPH 依赖性DTNB( 5, 5’ - 二硫2- 硝基苯酸) 和胰岛素的还原反应, 以上特点与已分类鉴定的TR 完全相同, 这是人们首次证实TR 是一种含硒酶。目前Trx 主要分为Trx 1 和Trx 2 两型, Tr x1 位于细胞浆和细胞核中, 而T rx2 仅位于线粒体中。研究发现Trx 除了基本的氧化还原调节功能, 还有许多其他生物学活性, 因而其日益受到人们的重视。
药盒组成：（常温运输，4℃保存）
1． TRX缓冲液1瓶
2． TRX（第二抗体）1瓶，用前充分摇匀。
3． TRX标准品7瓶，浓度为10、20、40、80、160、320ng/mL
4． TRX抗体 1瓶。
5． 125I –TRX 1瓶
标本的收集：空腹抽静脉血2ml离心取血清，-20℃保存三个月。
测定方法：本实验采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按下表操作：
TRX RIA加液程序 （单位： ul ）
————————————————————————————
试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
————————————————————————————
缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I- TRX 100 100 100 100 100
————————————————————————————
摇匀4℃ 放置24小时
————————————————————————————
分 离 剂 —— 500 500 500 500
————————————————————————————
混匀，室温放置15分钟后，3500 转/分 4℃离心20 min，弃上清液，测沉淀cpm数。
结果计算：
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值，或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。
注意事项：
本月标准品每瓶用 0.5 ml 缓冲液稀释
本月药盒抗体每瓶用 10 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 10.5ml ml缓冲液溶解
本月药盒有效期为一个月，分离剂在使用前充分混匀（不可冰冻）
本试剂盒主要技术指标：
1、 NSB：<5%。
2、 灵敏度：<100pg/ml。
3、 标准曲线范围：0-4000ng/L
4、 批内变异系数：CVw<7.1%；
批间变异系数：CVw < 10% 。
5、 正常参考值：各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
24.816士4.907 ng/mL
本月药盒参考数据：
—————————————————————————————————————————
T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
—————————————————————————————————————————
CPM
—————————————————————————————————————————
N/T% B0/T% B/ B0 %
—————————————————————————————————————————
地址：北京市海淀区上地信息路2号上地七街国际创业园东区1号楼12层12A
北京华英生物技术研究所
免费电话：8008109828
邮 编： 100085
电 话：（010）88114651 (010) 56146198
传 真：（010）88112680
网址：www.sinoukbio.com
E-Mail:sinouk@163.com
QQ客服：1749417768
|
