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科研药盒，慎用于临床
线粒体呼吸链ATP酶试剂盒说明书
F1F0-ATP(HY-60126)KIT
线粒体呼吸链复合物V，通常称为ATP合成酶（ATP synthase）、F型ATP酶（F type ATPase）和F1F0 ATP酶（F F1Fo ATPase），是线粒体氧化磷酸化的终极反应。其分子量为500KD，含有十六个亚单位，其中两个：ATP酶6和8为线粒体DNA编码的。ATP酶主要有两个结构域：F0为质子通道，由几个膜蛋白构成，包括a、b、c、d、e、F6、A6L、OSCP（oligomycin sensitive conferring protein）等；和F1催化活性结构域，由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其最特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。在正常人体组织中，F1F0 -ATP合成酶主要在线粒体内膜上定位，但也有少量存在于内皮细胞的细胞膜上。F1Fo—ATP合成酶首次在肿瘤细胞的表面被检测到，后来很多实验证实F1Fo—ATP合成酶存在于所有能量转换的膜上。很多肿瘤细胞超量表达F1Fo -ATP合成酶，并大量定位于细胞膜上。因而肿瘤细胞膜上的F1Fo—ATP合成酶是一个潜在的抗肿瘤药物靶标。该酶异常也会导致心肌和神经系统疾病。
检测原理：基于ATP，在寡霉素参与下，受到F1Fo ATP酶的水解，ATP可被解离成ADP与无机磷酸的生成量来表示酶的活性，产生的吸光峰值的变化（660nm），来定量分析F1Fo ATP酶活性
试剂盒组成：
试剂1： A液 1瓶 （内含寡酶素） B液 1瓶
试剂2：混合液 1瓶
试剂3：液体 1瓶
标准品：1瓶
操作步骤：
F1F0-ATP酶操作步骤 单位（ul）
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A管 B管
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试剂1 200 200
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37度 水浴 保温15分钟
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样本 200 200
标准品 200 200
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混匀，反应1小时
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试剂2 200 200
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混匀 ，反应1分钟后
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试剂3 200 200
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混匀 反应20分钟后 660nm 生化仪读取OD值
计算结果
如果没有全自动生化仪或半自动生化仪，将标准品用缓冲液（R1）进行倍比稀释后的单位浓度为横坐标，以对应管的吸光度OD值为纵坐标作图，待测管OD值在曲线上查出对应的浓度值。（适用于分光光度计）结果
全自动或半自动生化仪直接读取结果。
最终结果=B值—A值
正常参考值：
各实验室应建立自己的正常值，酶活力单位定义：以每毫克细胞膜蛋白与底物在37度缓冲液中温浴1分钟水解ATP酶释放出的无机磷量来表示。
F1Fo—ATP合成酶活力单位为：nmol Pi*min-1*mg-1膜蛋白
注意事项：
1. 样品测定值超过上限，用生理盐水稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。
2. 本法以定值血清为标准，准确性高。
3. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氮钠，应避免直接接触皮 肤和眼睛，切勿吞咽。
4. 本产品应在2~8℃避光贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
精密度：批内变异系数：CVw<7.3%；
批间变异系数：CVw < 10%
生产日期：
有效日期：
生产批号：
备注：其中寡霉素为SIGMA生产
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北京华英生物技术研究所
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