本药盒为科研药盒,慎用于临床诊断
过敏毒素C5a放免药盒操作说明书
C5a(HY-10233) RIA KIT
C5a是补体C5的活化产物,是一个由74个氨基酸组成的糖肽,分子量为11200,PI为8.5-8.7,与C3a、C4a一起共称为过敏毒素。C5a是人体最强的过敏毒素,在补体系统被激活过程中,C5被分解为C5a和C5b,其中C5b继续参与膜攻击复合物的形成,而C5a以游离形式存在,独自发挥作用。它可刺激中性粒细胞做定向移动,能诱导多种急性炎症反应;可以通过对不同凝血因子及凝血酶的调节,来实现对凝血系统的调节。C5a是连接固有免疫应答和获得性免疫应答的成分之一,可以通过对各种细胞因子的调节影响免疫系统。
药盒组成:(常温运输,4℃保存)1、缓冲液(PBS)1瓶。用时每瓶加蒸馏水至50ml..
2、 PR分离剂(第二抗体)
3、 C5a抗体1瓶:用前充分摇匀
4、125I- C5a 1瓶:
5、C5a标准品5瓶,浓度为10、20、40、80、160ng/ml
样品收集:
1、血清采集:取静脉血2ml,注入试管待凝固后,4℃3000rpm离心,10min,分离血清。放-20℃,样品可保存2个月,在-70℃以下可存放半年。测定前使样本置于室温或冷水中复融,再次4℃3000rpm离心,5 min,取上清测定
2、组织样品的处理: 取组织称重0.3~0.5g,用新华滤纸吸干组织液和血液,加生理盐水1毫升(含0.05mol/l醋酸20ul),进行研磨,使组织充分粉碎,以3000r/min速度离心10min取上清,沉淀加生理盐水0.5毫升(含0.05mol/l醋酸20ul),以3000r/min速度离心10min取上清,两次上清合并,用0.05mol的NaOH25ul(调PH值7.4左右)
测定方法:(非平衡法加样)
C5a RIA加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
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缓 冲 液 —— 100 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
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摇匀4℃ 放24小时
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125I- C5a 100 100 100 100 100
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摇匀4℃ 放24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温15分钟, 3500 转/分 4℃离心20分钟,吸弃上清液,测定沉淀cpm数。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值, 或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:
本月标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标:
1. NSB:7%。
2. 灵敏度:<1ng/ml。
3. 标准曲线范围:10~160ng/ml。
4. 批内变异系数:CVw<7.0 %。
5. 批间变异系数:CVw < 12.0% 。
6. 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
32±12ng/ml(n=25)。
本次药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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生产日期:
有效日期:
生产批号:
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