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                                                                                           本药盒为科研药盒,慎用于临床诊断
                    过敏毒素C5a放免药盒操作说明书
                           C5a(HY-10233) RIA  KIT
     C5a是补体C5的活化产物,是一个由74个氨基酸组成的糖肽,分子量为11200,PI为8.5-8.7,与C3a、C4a一起共称为过敏毒素。C5a是人体最强的过敏毒素,在补体系统被激活过程中,C5被分解为C5a和C5b,其中C5b继续参与膜攻击复合物的形成,而C5a以游离形式存在,独自发挥作用。它可刺激中性粒细胞做定向移动,能诱导多种急性炎症反应;可以通过对不同凝血因子及凝血酶的调节,来实现对凝血系统的调节。C5a是连接固有免疫应答和获得性免疫应答的成分之一,可以通过对各种细胞因子的调节影响免疫系统。
药盒组成:(常温运输,4℃保存)1、缓冲液(PBS)1瓶。用时每瓶加蒸馏水至50ml..    
2、 PR分离剂(第二抗体)
3、 C5a抗体1瓶:用前充分摇匀
4、125I- C5a 1瓶:
5、C5a标准品5瓶,浓度为10、20、40、80、160ng/ml
 样品收集:
  1、血清采集:取静脉血2ml,注入试管待凝固后,4℃3000rpm离心,10min,分离血清。放-20℃,样品可保存2个月,在-70℃以下可存放半年。测定前使样本置于室温或冷水中复融,再次4℃3000rpm离心,5 min,取上清测定
     2、组织样品的处理: 取组织称重0.3~0.5g,用新华滤纸吸干组织液和血液,加生理盐水1毫升(含0.05mol/l醋酸20ul),进行研磨,使组织充分粉碎,以3000r/min速度离心10min取上清,沉淀加生理盐水0.5毫升(含0.05mol/l醋酸20ul),以3000r/min速度离心10min取上清,两次上清合并,用0.05mol的NaOH25ul(调PH值7.4左右)
测定方法:(非平衡法加样)
                       C5a    RIA加液程序        (单位: ul )
             ————————————————————————————
                试   剂      T     NSB     S0   S1~S5    样  品
             ————————————————————————————
               缓 冲 液    ——    100     100    ——      ——
               标 准 品    ——    ——    ——    100      ——
               样    品    ——    ——    ——   ——      100
               抗    体    ——    ——     100    100      100
            ————————————————————————————
                              摇匀4℃ 放24小时                   
            ————————————————————————————
              125I- C5a    100     100     100    100       100
            ————————————————————————————                   
                              摇匀4℃ 放24小时
            ————————————————————————————
               分 离 剂    ——     500     500    500      500     
            ————————————————————————————
      混匀,室温15分钟, 3500 转/分 4℃离心20分钟,吸弃上清液,测定沉淀cpm数。

结果计算:
    以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值, 或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:
         本月标准品每瓶用          ml缓冲液稀释
         本月药盒抗体每瓶用        ml缓冲液稀释    
         本月药盒标记每瓶用        ml缓冲液稀释 
         本月分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标:
1. NSB:7%。
2. 灵敏度:<1ng/ml。
3. 标准曲线范围:10~160ng/ml。
4. 批内变异系数:CVw<7.0 %。
5. 批间变异系数:CVw < 12.0% 。
6. 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
                 32±12ng/ml(n=25)。 
 本次药盒参考数据:    
           ——————————————————————————————
                  T     NSB     S0     S1    S2   S3    S4   S5      
           ——————————————————————————————
            CPM
           ——————————————————————————————
                    N/T%      B0/T%      B/ B0 %
           ——————————————————————————————   
      生产日期:
      有效日期:
      生产批号:

     

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