自噬相关蛋白5
酶联免疫试剂盒使用说明书
HY-NE301 ATG5 ELISA KIT
使用前仔细阅读本说明书。本试剂盒采用酶联双抗夹心法,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
自噬(autophagy)是细胞内的一种“自食”现象,是指膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体(autophagosome),最后与溶酶体融合形成自噬溶酶体(autophagolysosome),降解其所包裹的内容物,以实现细胞稳态和细胞器的更新。ATG5(autophagy related gene5,ATG5),自噬相关蛋白5,分子量为32Kda,位于细胞浆内。ATG5是自噬所必需的,与ATG12结合并与隔离膜结合形成杯状隔离膜和自噬体,结合物在自噬体形成之前或之后立即从膜上分离(通过相似性),可能在修饰的细胞骨架内。它的表达是凋亡过程中相对较晚的事件,发生在caspase活性的下游,在凋亡过程中起重要作用。
标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。
药盒组成:
1) 酶标试剂HRP 1 瓶。
2) ATG5抗体1瓶。
3) 生物素标记ATG5抗体 1瓶
4) ATG5标准品6瓶,浓度为0、50、100、200、400、800pg/ml
5) 96微孔板1块
6) 显色液1瓶。
7) 稀释液1瓶
8) 终止液 1瓶。
9) 洗涤液
10) 说明书
11) 封板膜
12) 密封袋
操作方法:
1) 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):
2) 每孔加入抗体100ul包被2小时
3) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
4) 每孔加入封闭液200ul,轻轻晃动混匀,室温静置30分钟
5) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
6) 每孔加入标准品、标本各100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟
7) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
8) 每孔加入HRP100ul轻轻晃动混匀,室温静置60分钟
9) 弃去液体,甩干,每孔加稀释后洗涤液300ul,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
10) 每孔加入显色液100ul,轻轻晃动混匀,显色15分钟
11) 每孔加入终止液100UL终止反应(此时蓝色立转黄色)。
12) 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
注意事项
1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数
4. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内,震荡30秒。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
a) 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
b) 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实
本试剂盒主要技术参数:
标准范围:0-800 pg/ml
灵敏度: <0.5pg/ml
精密度:批内变异系数:CVw<7.3%;
批间变异系数:CVw < 10%
规格: 96T/盒
保存: 2-8℃
有效期: 6个月(2-8℃)。
批号:20200210
地址:北京市海淀区上地信息路2号国际创业园1号楼12层12A
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