方法学原理 通过钠依赖性β-半乳糖苷酶催化底物ONPG的酶动力学反应检测钠,其产物O-硝基苯酚在405nm的吸光值与钠浓度成正比。 Na+ ONPG--------------->O-硝基苯酚+半乳糖 β-半乳糖苷酶 ONGP=O-硝基酚-β-D-吡喃半乳糖 样品收集处理 血清,或肝素锂抗凝血浆。 试剂成份 成 份 | 实验浓度 | R1.缓冲液/酶/底物 |
| Tris缓冲释液 | 450mmol/L,PH9.0 | 穴合剂 | 5.4mmol/L | β-半乳糖苷酶 | ≥0.8U/mL | R2.酶/稀释液 |
| Tris缓冲液 | 10.0mmol/l.Ph6.0 | O-硝基酚半乳糖苷 | 5.5mmol/l | CAL1.标准1 | 详见说明书 | CAL2.标准2 | 详见说明书 |
试剂准备 R1.缓冲液/酶/底物 将缓冲液R1a加至酶试剂瓶R1b,轻轻旋转使其内容物全部溶解,注意避免形成泡沫,在2-8℃环境下可稳定2周或在15-25℃环境下可稳定5天。 R2.酶/稀释液 将稀释液R2a加至底物试剂瓶R2b,轻轻旋转使其内容物全部溶解,注意避免形成泡沫,在2-8℃环境下可稳定4周或在15-25℃环境下可稳定2周。 标准1和标准2:标准随时可取用,在2-25℃环境下可稳定至效期。 手工操作步骤 检测波长 | 405nm | 比色杯 | 光径为1cm | 孵育温度 | 37℃或30℃ | 检测 | 以试剂为空白 |
加入比色杯中
| 空白 | 标准 | 样品 | 双蒸馏水 | 40μl |
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| 标准 | - | 40μl | - | 样品 | - | - | 40μl | 1缓冲液/酶 | 1000μl | 1000μl | 1000μl |
37℃或30℃混合孵育5分钟,然后加入 充分混合于37℃或30℃孵育1分钟,读取吸光值(A1),再孵育2分钟后读取吸光值(A2)。 ΔA样品或标准= A2-A1 校准 1. 使用盒内附带的标准来校正。 2. 如使用朗道复合校准血清CAL2351,第一点用CAL2351做4/5稀释(CAL2351:蒸馏水=4:1)。第二点使用CAL2351原浓度。 3. 每天都应做校准。 质量控制 建议使用Randox的多项质控血清水平2和水平3 做质控,建议每天做质控。结果应该落在特定的范围内。如果结果偏离范围,请按以下步骤查找原因: 1. 检查参数设置和光源是否正确。 2. 检查比色杯和吸样针是否洁净。 3. 检查水是否被污染,细菌增长会导致不正确的结果。 4. 检查反应温度。 5. 检查试剂盒的效期。 参考范围 136-146mmol/L (313-336mg/dl) 建议各实验室建立自己的正常参考范围。 线性 钠浓度在80~180mmol/L(184~414mg/dl)时呈线性。 干扰性 胆红素≤665.125umol/L,Hb≤10g/L,TG≤13.183mmol/L不会对该试验产生干扰。 灵敏度 本方法可测得的血清中最小钠离子浓度为58.27mmol/L。
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