科研药盒，慎用于临床

            木聚糖酶试剂盒操作说明书

       Xylanase （HY-NE042）KIT

木聚糖酶(xylanase)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，ACX一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌.

检测原理：

CX在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算ACX活力。

试剂组成：

缓冲液：液体   1瓶

试剂1：液体      1瓶

试剂2：液体      1瓶

试剂3：液体      1瓶

标准品：粉剂     1支（10mg木糖，临用前加入667ul蒸馏水溶解，得到100umol/ml木糖溶液，蒸馏水稀释50倍得到2nmol/ml木糖标准溶液）

操作步骤：

1.发酵液：发酵液于8000rpm，4度，离心15min，取上清，作为待测样品

2.   酶干粉：称约1mg，加1ml缓冲液溶解，蒸馏水稀释10倍待测。

3.   组织样品：称约0.1g组织，加入1ml缓冲液，冰上充分研磨。8000rmp，4度，离心15min，取上清蒸馏水稀释10倍待测。

                      测定步骤                       单位（ul）

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                     对照管      测定管       空白管        标准管

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样品                   60          60          ——          ——

标准品                ——         ——        ——           60

蒸馏水                ——         ——         60           ——    

缓冲液                 90           90          90            90

试剂1                 ——          60          60            60

        混匀，50度水浴反应30min，立即沸水浴中10min灭活。（注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系）

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试剂1                  60         ——         ——          ——   

试剂3                  30          30           30            30

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        混匀，沸水浴中5min（注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系）冷却后吸取200ul至96孔板或比色皿中，尽快测定各管540nm下的吸光度，分别记为A测定，A对照，A标准，A空白。

 计算结果

酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1µmol 还原糖所需的酶 量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。 ACX 活力（U/mL）=C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷T =0.067×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）

 C 标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；T：反应时间，30min。

2. 酶干粉 ACX 活力计算： 酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1µmol 还原糖所需的酶量为 一个酸性木聚糖酶的活力单位。 ACX 活力（U/mg）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 提取÷W1÷T =0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W1

 10：样本稀释倍数，10 倍；C 标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；V 提取：加入缓冲液体 积，1mL；W1：酶干粉重量，mg；T：反应时间，30min。 3. 组织中 ACX 活力计算：

（1）按样品蛋白浓度计算： 酶活定义：50 ℃，pH 4.8 条件下，每 mg 组织蛋白每分钟分解木聚糖产生 1µmol 还原糖所需的 酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。 ACX 活力（U/mg prot）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 样品÷（V 样 品×Cpr）÷T=0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷Cpr

（2）按样品鲜重计算： 酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每克组织每分钟分解木聚糖产生 1µmol 还原糖所需的酶量为 一个酸性木聚糖酶的活力单位。 ACX 活力（U/g 鲜重）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 提取÷W2÷T =0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W2

10：样本稀释倍数，10 倍；C 标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；V 提取：加入缓冲液体 积，1mL；W2：样本鲜重，g；T：反应时间，30min；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；V 样品：加入 的样品体积，0.06mL。

注意事项： 吸光度变化应该控制在 0.01~1.5 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应的改变。

正常考值：

各实验室应建立自己的正常值，下列正常参考值仅供参考：

注意事项：

1. 样品测定值超过上限，用生理盐水稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。

2. 本法以定值血清为标准，准确性高。

3. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氮钠，应避免直接接触皮   肤和眼睛，切勿吞咽。

4. 本产品应在2~8℃避光贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。

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