磷脂酶A2受体抗体试剂盒

（酶联免疫法）说明书

PLA2R   ELISA  KIT  

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体一步夹心技术原理，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

磷脂酶A2受体抗体（Phospholipase A2 Receptor Antibody）检测，一般用于特发性膜性肾病的辅助诊断、病情评估及治疗监测。

    检验原理：在已包被小鼠抗PLA2R抗体捕获抗体的微孔板中，依次加入标本、标准品、辣根过氧化物酶标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗磷脂酶A2受体抗体呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过阴阳质控判断抗体性质。

标本的收集：取静脉血2ml于试管中，凝固分离血清，-20℃保存二个月

药盒组成：

1)        酶标抗体   6ml X 1瓶

2)        质控品     0.5ml x 2瓶（分别为阴，阳）

3)        显色剂A   7ml X 1瓶

4)        显色剂B   7ml X 1瓶

5)        终止液     7ml X 1瓶

6)        浓缩洗涤液  15ml X 1瓶

7)        预包被板

8)        封板膜

9)        封口袋

 操作方法：

1)        将各种试剂移至室温平衡半小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水1:20稀释，混匀后备用。

2)        将预包被板从密封袋中取出，设一个空白对照孔，不加任何液体，每个质控点依次各设两孔，每孔加入相应质控品50ul，其余每个检测孔直接加待测标本50ul。然后各孔加入酶标抗体50ul，充分混匀，贴上封板膜，置37℃温育1小时。

3)        手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。

4)        每孔加显色剂A液50ul，显色剂B液50ul，振荡混匀后，置37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50ul。

5)        用双波长酶标仪可以不设空白对照孔，也无需调零点。必配450nm滤光片，选配600-630nm滤光片，单波长酶标仪必须设空白对照孔，先用空白对照孔调零，然后测量。

结果计算：根据质控品OD值判断待测标本的阴阳性。P/N比值法：以阳性孔OD值与阴性孔OD值的比值作为判定标准。通常，P/N ≥ 2.1为阳性，1.5 < P/N < 2.1为可疑，P/N ≤ 1.5为阴性

注意事项

1．    从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．    各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差

3．    建议所有质控品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数

4．    严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5．    为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6．    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7．    底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少300ul注入孔内，震荡30秒。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

a)         不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

b)   标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验

本试剂盒主要技术参数：

    精密度：批内变异系数：CVw<5 %,   批间变异系数：CVw < 10% 。

    规格：    96T/盒

  保存：    2-8℃

  有效期：  6个月（2-8℃）。

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